Convertisseur de concentration en protéines
Convertissez une mesure d’A280 en concentration. Choisissez d’abord la protéine : son coefficient d’extinction fixe l’échelle.
C’est à peu près autant qu’une solution de travail. Un échantillon de 20 µL à cette concentration contient environ 20 µg de protéines.
Ce que ça représente
Cela fait combien de protéines ?
L’A280 suppose un trajet optique de 1 cm et une protéine à teneur ordinaire en acides aminés aromatiques. Une contamination par des acides nucléiques absorbe aussi à 280 et gonfle la mesure.
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Votre concentration dans toutes les unités
Comprendre
Trois choses à savoir
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Concentration = A280 ÷ coefficient d’extinction
Avec le coefficient exprimé pour une solution à 1 mg/mL dans une cuve de 1 cm. Pour une protéine de séquence inconnue, on prend généralement 1,0.
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Beer et Lambert
L’absorbance est proportionnelle à la concentration et au trajet optique : c’est la loi de Beer-Lambert. Elle tient jusqu’à ce que l’échantillon soit si concentré que les molécules se font de l’ombre.
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La BSA fait exception
L’albumine a inhabituellement peu de tryptophanes : son A280 de 0,667 par mg/mL est bien en dessous de la plupart des protéines. L’utiliser comme étalon générique sous-estime toutes les autres.
Raccourcis
Conversions courantes : concentration
Le contexte
À propos de l’A280
Les protéines absorbent l’ultraviolet à 280 nm, surtout grâce à leur tryptophane et leur tyrosine. Mesurer cette absorbance est le dosage le plus rapide qui soit : pas de réactif, pas d’incubation, et l’échantillon survit.
Le piège, c’est que le coefficient d’extinction dépend de la protéine : une A280 de 1,0 correspond à 0,74 mg/mL d’IgG mais à 1,5 mg/mL de sérumalbumine bovine.